蛋白质芯片技术是怎么回事?蛋白质芯片技术可以应用在哪些方面?

来源:汪清新闻网 | 2023-03-20 13:55:09 |

蛋白质芯片是一种高通量的蛋白功能分析技术,可用于蛋白质表达谱分析,研究蛋白质与蛋白质的相互作用,甚至DNA-蛋白质、RNA-蛋白质的相互作用,筛选药物作用的蛋白靶点等。蛋白芯片技术的研究对象是蛋白质,其原理是对固相载体进行特殊的化学处理,再将已知的蛋白分子产物固定其上(如酶、抗原、抗体、受体、配体、细胞因子等),根据这些生物分子的特,捕获能与之特异结合的待测蛋白(存在于血清、血浆、淋巴、间质液、尿液、渗出液、细胞溶解液、分泌液等),经洗涤、纯化,再进行确认和生化分析;它为获得重要生命信息(如未知蛋白组分、序列。体内表达水生物学功能、与其他分子的相互调控关系、药物筛选、药物靶位的选择等)提供有力的技术支持。

蛋白质芯片技术可以应用在哪些方面?

1.基因表达的筛选。AngelikaL.等人从人胎儿脑的cDNA文库中选出92个克隆的粗提物制成蛋白质芯片,用特异的抗体对其也进行检测,结果的准确率在87%以上,而用传统的原位滤膜技术准确率只达到63%。与原位滤膜相比,用蛋白质芯片技术在同样面积上可容纳更多的克隆,灵敏度可达到pg级。

2.抗原抗体检测。在CavinM.等人的实验中,蛋白质芯片上的抗原抗体反应体现出很好的特异,在一块蛋白质芯片上10800个点中,根据抗原抗体的特异结合检测到唯一的1个阳位点。Cavin M.指出,这种特异的抗原抗体反应一旦确立,就可以利用这项技术来度量整个细胞或组织中的蛋白质的丰富程度和修饰程度。其次利用蛋白质芯片技术,根据与某一蛋白质的多种组分亲和的特征,筛选某一抗原的未知抗体,将常规的免疫分析微缩到芯片上进行,使免疫检测更加方便快捷。

3.筛选及研究。常规筛选蛋白质主要是在基因水上进行,基因水的筛选虽已被运用到任意的cDNA文库,但这种文库多以噬菌体为载体,:通过噬菌斑转印技术在一张膜上表达蛋白质。但由于许多蛋白质不是全长基因编码,而且真核基因在细菌中往往不能产生正确折叠的蛋白质,况且噬菌斑转移不能缩小到毫米范围进行,所以这种方法的局限,靠蛋白质芯片弥补。酶作为一种特殊的蛋白质,可以用蛋白质芯片来研究酶的底物、激活剂、抑制剂等。蛋白质芯片为蛋白质功能研究提供了新的方法,合成的多肽及来源于细胞的蛋白质都可以用作制备蛋白质芯片的材料。Uetz将蛋白质芯片引入酵母双杂交研究中,大大提高了筛选率。建立了含6O0O个酵母蛋白的转化子,每个都具有开放可阅读框架的融合蛋白作为酵母双杂交反应中的激活区,此蛋白质芯片检测到192个酵母蛋白与此发生阳反应。

4.生化反应的检测。对酶活的测定一直是临床生化检验中不可缺少的部分。Cohen用常规的光蚀刻技术制备芯片、酶及底物加到芯片上的小室,在电渗作用中使酸及底物经通道接触,发生酶促反应。通过电泳分离,可得到荧光标记的多肽底物及产物的变化,以此来定量酶促反应结果。动力学常数的测定表明该方法是可行的,而且,荧光物质稳定。Arenkov进行了类似的试验,他制备的蛋白质芯片片的一大优点,可以反复使用多次,大大降低了试验成本。

5.药物筛选。疾病的发生发展与某些蛋白质的变化有关,如果以这些蛋白质构筑芯片,对众多候选化学药物进行筛选,直接筛选出与靶蛋白作用的化学药物,将大大推进药物的开发。蛋白质芯片有助于了解药物与其效应蛋白的相互作用,并可以在对化学药物作用机制不甚了解的情况下直接研究蛋白质谱。还可以将化学药物作用与疾病联系起来,以及药物是否具有毒副作用、判定药物的治疗效果,为指导临床用药提供实验依据。另外,蛋白芯片技术还可对中药的真伪和有效成分进行快速鉴定和分析。

6.疾病诊断。蛋白质芯片技术在医学领域中有着潜在的广阔应用前景。蛋白质芯片能够同时检测生物样品中与某种疾病或者环境因素损伤可能相关的全部蛋白质的含量情况,即表型指纹。表型指纹对监测疾病的过程或预测,判断治疗的效果也具有重要意义。Ciphelxen Biosystems公司利用蛋白质芯片检测了来自健康人和前列腺癌患者的血清样品,在短短的三天之内发现了6种潜在的前列腺癌的生物学标记。Englert将抗体点在片基上,月它检测正常组织和肿瘤之间蛋白质表达的差异,发现有些蛋白质的表达,如前列腺组织特异抗原,明胶酶 蛋白在肿瘤的发生发展中起着重要的作用,这给肿瘤的诊断和治疗带来了新途径。应用蛋白质芯片在临床上还发现乳腺癌患者中的28.3KD的蛋白质;存在于结肠癌及其癌前病变患者的血清13.8KD的特异相关蛋白质。


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